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ELISA封闭液和洗涤液

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ELISA微板孔的结合能力通常高于每个孔中的蛋白质包被量。必须封闭剩余的表面积,以防止抗体或其它蛋白质在后续步骤中吸附到板上。封闭液是不相关蛋白质、蛋白质混合物或其它化合物的溶液,它们被动地吸附在板的所有剩余结合面上。封闭液能有效减少背景信号和提高信噪比,从而提高检测的灵敏度。理想的封闭液将与所有非特异性相互作用的潜在位点结合,完全消除背景,而不会改变或模糊抗体结合的表位。

在开发任何新的ELISA时,测试几种不同的封闭剂以获得最高的信噪比是非常重要的。影响非特异性结合的因素有很多,包括各种蛋白质:样本特有的蛋白质相互作用和相关抗体。选择封闭剂时最重要的参数是信噪比,它是用含有目标分析物的样品获得的信号来测量的,而不是用不含目标分析物的样品获得的信号。使用不足量的封闭剂会导致背景过大,并降低信噪比。使用过量浓度的封闭剂可能会掩盖抗体-抗原的相互作用或抑制酶,从而再次降低信噪比。没有任何一种封闭剂在各种情况下都是理想的,而经验测试对于真正优化封闭步骤至关重要。   

除封闭外,在ELISA的每个步骤之间进行彻底的洗涤也是必不可少的。必须执行洗涤步骤以去除未结合的试剂并降低背景,从而提高信噪比。洗涤不足会导致高背景,而过度洗涤可能会由于从孔中洗脱抗体和/或抗原而导致灵敏度降低。在没有任何添加剂的缓冲液(如Tris缓冲盐水(TBS)或磷酸盐缓冲盐水(PBS))中进行洗涤。通常,将诸如0.05%Tween-20之类的去污剂添加到洗涤液中,以帮助去除非特异性结合的物质。另一种常用技术是使用封闭液的稀释溶液以及一些添加的去污剂。在洗涤液中添加去污剂有助于最小化背景信号的影响。为了获得最佳结果,请使用高纯度去污剂以防止杂质干扰测定,例如酶抑制剂或过氧化物。

选择适合您实验的封闭液

product

ELISA

WB

IHC

Nucleic Acid detextion

SuperBlock Blocking Buffers


StartingBlock Blocking Buffers


Blocker Casein Blocking Buffers

Blocker BSA Blocking Buffers

Blocker BLOTTO Blocking Buffers


SEA BLOCK Blocking Buffer



Pierce Protein-Free



                          

货号

名称

规格

37530               

Blocker™ BLOTTO in TBS

1 L

37520

Blocker™ BSA (10X) in TBS

125 mL

37525

Blocker™ BSA (10X) in PBS

200 mL

37582

Blocker™ Casein in PBS

100 mL

37528

1 L

37583

Blocker™ Casein in TBS

100 mL

37532

1 L

37584

Pierce™ Protein-Free (PBS) Blocking   Buffer

100 mL              

37572

1 L

37573

Pierce™ Protein-Free T20 (PBS) Blocking   Buffer                        

1 L

37570

Pierce™ Protein-Free (TBS) Blocking   Buffer

1 L

37571

Pierce™ Protein-Free T20 (TBS) Blocking   Buffer

1 L

37538

StartingBlock™ (PBS) Blocking Buffer

1 L

37578

100 mL

37539

StartingBlock™ T20 (PBS) Blocking Buffer

1 L

37542

StartingBlock™ (TBS) Blocking Buffer

1 L

37579

100 mL

37543

StartingBlock™ T20 (TBS) Blocking Buffer

1 L

37580

SuperBlock™ (PBS) Blocking Buffer

100 mL

37515

1 L

37518

5 L

37516

SuperBlock™ T20 (PBS) Blocking Buffer

1 L

37517

SuperBlock™ (PBS) Blocking Buffer -   Blotting

1 L

37581

SuperBlock™ (TBS) Blocking Buffer

100 mL

37535

1 L

37545

SuperBlock™ (TBS) Blocking Buffer Dry   Blend

5 packs

37536

SuperBlock™ T20 (TBS) Blocking Buffer

1 L

37537

SuperBlock™ (TBS) Blocking Buffer -   Blotting

1 L

T2015

I-Block™ Protein-Based Blocking Reagent

30 g


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