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利用记忆性B细胞制备中和抗体

抗体制备


新病原体的出现和传播是对人类健康的持续威胁。疫苗接种可以提供积极和持续的保护,但新疫苗的开发是一个缓慢的过程。虽然早期有科学家提出从超免疫血清注射多克隆免疫球蛋白来进行病毒预防和治疗,但这种方法仍然存在诸多问题。而单克隆抗体是超免疫血清的理想替代品。

2004年,发表在Nature Medicine上的一篇文章“An efficient method to make human monoclonal antibodies from memory B cells: potent neutralization of SARS coronavirus”(作者:Elisabetta Traggia;通讯作者:Antonio Lanzavecchia)采用改进的EBV转化方法,对1例SARS-CoV感染后恢复的患者的记忆B细胞进行永生化,并分离出几种具有高病毒中和活性的单克隆抗体以在体内和体外中和病毒。

推荐:使用EasySep™人IgG+记忆B细胞分选试剂盒(stemcell,#17868)或者IgG+ Memory B Cell Isolation Kit(MB,#130-094-350)分离记忆B细胞。


研究思路


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实验结果


1. 研究人员对感染SARS-CoV后恢复的患者产生的抗体进行分析,发现其中起作用的抗体只有IgG1。因此他们重点研究了记忆B淋巴细胞,对永生化的记忆B细胞进行培养后,在培养上清中得到的抗体对SARS-CoV抗原能产生中和能力。

2. 接着,研究人员从第一次筛选和克隆中鉴定出一种显示中和效价的培养物,其中一个克隆S3.1产生了IgG1,k(kappa)中和单克隆抗体。当从培养上清中纯化并测试其中和SARS-CoV的能力时,S3.1抗体以300 ng/ml的浓度中和SARS-CoV,结合能力比恢复期病人的血清高300倍(图1a)。此外,免疫电镜的结果也显示S3.1单抗可以结合SARS Spike蛋白(图1bc)。

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图1. SARS-CoV中和S3.1单克隆抗体的特性

(a)用纯化的S3.1抗体(圆圈)和6个月恢复期血清(方形)对SARS-CoV-spike基因转染的BHK细胞进行染色。填充部分表示观察到完全中和的抗体浓度。(b, c)免疫电镜检测SARS-CoV的染色。左上,阴性对照;右上三张,恢复期血清;左下,非中和B细胞克隆上清液;右下三张,S3.1单克隆抗体。柱状,100nm。


3. 同时,为了检测S3.1抗体在体内的中和效率。研究人员还对注射了单克隆抗体S3.1的小鼠感染SARS-CoV,发现被注射了S3.1抗体的小鼠未受到病毒感染。证明S3.1单抗在体内也具有中和作用。


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